错配修复的检测意义

• 核心功能：识别和纠正DNA复制错误，维持基因组稳定性
• 状态分类：错配修复功能完整（pMMR）、错配修复功能缺陷（dMMR）
• 发生率：dMMR/MSI - H在肿瘤中总体发生率约2.9%，子宫内膜癌、小肠癌等发生率较高
• 应用：Lynch综合征筛查、子宫内膜癌分子分型、预后与化疗敏感性评估、免疫检查点抑制剂治疗疗效预测

错配修复蛋白/MSI检测技术

• 检测方法：免疫组织化学（IHC）、聚合酶链反应（PCR）、下一代测序（NGS）
• 优缺点：各有优缺点，IHC与DNA MSI检测有较高一致性
• 推荐意见：结直肠癌等建议将错配修复蛋白IHC作为常规检测方法之一；子宫内膜癌首选错配修复蛋白IHC；使用同一肿瘤组织块同时检测4个核心蛋白

错配修复蛋白IHC检测的基本要求

• 标本制备和处理：标本类型包括活检、手术切除及细胞蜡块标本；标本离体后30 min - 1 h内固定，固定时间6 - 48 h，最长不超过72 h
• 抗体、检测系统及染色方案：使用PQCC推荐的抗体克隆、检测系统及染色方案

抗体相关信息

• 抗体质控与实验步骤
  • MLH1（ES05）：多个染色平台合格通过率98.3%，NordiQC平均合格通过率74.6%，需配合高敏感三步法显色系统，推荐强度强
  • MLH1（M1）：合格通过率81.8%，NordiQC平均合格通过率66.5%，需配合扩增显色系统，推荐强度中等
  • MSH2（FE11等）：多个平台合格通过率100%，FE11平均合格通过率94.8%等，可配合两步或三步法显色系统，推荐强度强
  • MSH6（EP49等）：多个平台合格通过率83.3%，EP49平均合格通过率94.8%等，可配合两步或三步法显色系统，推荐强度强
  • PMS2（EP51）：多个平台合格通过率92.0%，NordiQC平均合格通过率88.2%，需配合高敏感三步法显色系统，推荐强度强
  • PMS2（A16 - 4）：合格通过率80.0%，NordiQC平均合格通过率28.0%，需配合扩增显色系统，推荐强度中等
• 抗体实验条件
  • EP51不同平台：抗原修复、一抗孵育时间、信号放大试剂、检测体系及推荐强度等信息
  • ES05不同平台：抗原修复、一抗孵育时间、信号放大试剂、检测体系及推荐强度等信息
  • FE11等不同平台：抗原修复、一抗孵育时间、信号放大试剂、检测体系及推荐强度等信息

错配修复蛋白IHC结果判读推荐

• 判读标准：表达完整/正常、表达缺失/异常、亚克隆表达缺失/异常的判读标准
• 常见陷阱：组织固定不充分、MSH2突变、MLH1点状或颗粒状着色等
• 处理建议：染色效果欠佳难以判读时，重复检测或更换蜡块，仍无改善判为“IHC结果不确定”，建议进一步行MSI检测
• 亚克隆缺失：在子宫内膜癌较常见，建议报告亚克隆缺失状态

检测报告规范

• 报告内容：包括错配修复蛋白名称、检测结果及适当说明或注释，结果表述涵盖检测蛋白名称、定性检测结果、检测结果注释，推荐补充pMMR或dMMR状态
• 示例：不同表达情况示例及提示状态
• 后续建议：MLH1表达缺失进一步检测建议，其他错配修复蛋白表达缺失模式检测建议，亚克隆缺失情况处理

结果不确定处理原则

• 建议2名及以上病理医师共同阅片，商议达成共识，必要时采取不同组织块、换抗体克隆号重复检测或补充其他检测方法

与MSI-PCR、NGS结果不一致处理原则

• dMMR/MSS原因：肿瘤细胞含量不足、检测试剂局限性、功能冗余、新辅助放化疗
• pMMR/MSI - H原因：错义突变、其他基因突变、肿瘤异质性、MLH1点状染色
• 处理建议：病理医师复核结果，分析原因，参与多学科讨论

质量控制

• 内部质控：监测样本固定质量，每例切片设外对照，用正常扁桃体或结肠/阑尾组织，确保检测条件一致，验证新批次试剂，评估结果一致性
• 外部质控：定期参加室间质评活动